Notre travail a pour but la mise en évidence de la production de molécules antibactériennes par des souches d'Actinomycetes isolées à partir du lac Oubeira d'El Kala. A partir de quatre-échantillons d'eau du lac, vingt-deux souches d'Actinomycètes ont été isolées et purifiées, en utilisant la tèchnique de dilution et un nombre important de milieux de culture, simples, sélectifs et électifs. La sélection a été basée sur les caractères macromorphologiques et cromorphalogique. Ces souches ont fait l'objet d'une étude portant sur leur capacité à produire des molécules tibactériennes vt sur leurs antibiotiques. Après le test d'activité antibactérienne portant sur l'ensemble des souches contre quatre souches de référence A TCC : 2 souches à Gram Positifs: Staphylococcus aureus A TCC XI (MRSA) multirésistante, Staphylococcus aureus A TCC X2 sensible et deux autres à Gram négatif: Pseudomonas aeruginosa y A TCC sensible, Escherichia coli Z A TCC qui présente une simple résistance contre l' ampicilline à large spectrre d'action, cinq d'entre elles se sont avérées actives mais avec absence d'activité antibactérienne sur les souches Gram négatif utilisées si ce n'est la souche S23 qui a une faible activité sur la souche P.aeruginosa y A TCC, les autres sont-actives sur les deux souches à Gram positif. La souche S 10 isolée à partir du centre du lac sur le milieu de culture Czapec simple concentration est la plus performante avec une zone d'inhibition de 24 mm sur la souche de référence S.aureus ATCC XI (M.R.S.A), agent d'infection nosocomiale distingué par sa multirésistance et sa capacité de provoquer de graves problèmes sur la santé publique. L'activité de la souche SlO est due à la production d'un métabolite antibactérien de couleur jaune secrété après 4 jours d'incubation à 28°C sur le milieu ISP2 liquide à un pR entre 5.31 et 7.52, cet antibiotique est extractible par le dichlorométhane, il est très polaire avec un rapport frontal de O.84.et il est le dernier produit obtenu lors de la purification par chromatographie sur colonne à gel de silice en utilisant le méthanol ( éluant très polaire). \Ce travail a permis de valoriser la microflore du lac Oubaira d'El-Kala par la présence des bactéries filamenteûses à Gram positif (Actinomycètes) capables de produire des molécules antibactériennes actives sur un agent d'infection nosocomial (S.aureus. MRSA).